减色效应

hypochromic effect　　

生物化学减色效应

在生物化学中，是指：若变性DNA复性形成双螺旋结构后，其260nm紫外吸收会降低,这种现象叫减色效应。　　

生物化学减色效应实验

1　引　言

研究了甲基紫与核酸分子相互作用的紫外——可见光谱，在pH7左右，核酸包括小牛胸腺DNA，热变性DNA，酵母RNA能够与甲基紫相互作用，甲基紫最大吸收峰在579 nm，随着核酸的加入发生明显的减色效应，减色强度随着核酸浓度加大而增强，据此建立测定核酸的新方法，该方法线性范围宽、简便、快速。

2　实验部分

2.1　主要仪器和试剂　λ-17紫外——可见分光光度计(美国Pekin-Elmer公司)。核酸溶液：小牛胸腺DNA，酵母RNA(中国科学院上海生物化学研究所)操作液浓度100 mg/L；甲基紫溶液：2×10-4 mol/L水溶液；Tris-HCl缓冲溶液：pH=7.4。试验用水均为二次蒸馏水。

2.2　实验方法　在10 mL比色管中加入0.90 mL 2×10-4 mol/L甲基紫，适量核酸溶液和1.5 mL Tris-HCl缓冲溶液，并稀释至刻度，然后以试剂空白作参比，测定579 nm处的吸光度值。

3　结果与讨论

3.1　紫外——可见光谱　

甲基紫的最大吸收峰579 nm，随着核酸的加入产生减色效应，其减色强度与核酸浓度成正比，减色效应最大是小牛胸腺DNA，酵母RNA最小。

3.2　最佳酸度的选择　

试验了不同介质条件下体系的减色效应影响，以1.5 mL pH 7.4 Tris-HCl缓冲溶液减色效应最强，且比较稳定。

3.3　甲基紫浓度的影响　

固定核酸浓度，试验了不同浓度甲基紫对体系的影响，实验结果表明2×10-4 mol/L甲基紫0.9 mL时体系减色效应最大，且与核酸浓度具有良好的线性关系。

3.4　反应时间的影响　

在室温条件下，体系的反应速度很快，5 min之内体系吸光度即可达到最大，并且在30 min之内基本保持稳定。

3.5　离子强度的影响　

通过加入NaCl溶液来改变体系的离子强度，随着NaCl浓度的加大，可以抑制核酸对甲基紫的减色效应，在配制溶液或缓冲溶液的选择时应避免离子强度过大。

3.6　共存物质的干扰　

按实验方法在一定量核酸存在下，大多数离子对核酸的测定影响不大，其测定结果的允许误差不超过±5%时，下列离子及有关物质不干扰测定(括号内的数字是核酸浓度的倍数)，即Ca2＋、Ba2＋、Mg2＋、Zn2＋（＞50)，Mo（Ⅵ）、W(Ⅵ)、Fe3＋、Ti（Ⅳ）、Cu2＋、Co2＋、Cd2＋（30），Fe2＋、As3＋（30），乌嘌呤(5)，胸腺嘧啶，嘌呤(3)对体系的测定无影响。唯有蛋白质对测定干扰较严重，测定前应预先除去蛋白质。

3.7　线性范围　

实验了不同浓度DNA，热变性DNA，RNA线性范围及工作曲线，不同浓度的实验结果表明：对于小牛胸腺DNA，热变性DNA和酵母DNA的线性范围分别为0～5．0，0～5．0，0～10．0 mg/L。拟合的线性方程分别为A=-0.10C+0.984,A=-0.089C+0.979和A=-0.039C+0.978(A为吸光度，C为浓度)其相关系数分别为0.998，0.997和0.995。可见本方法的优点是线性范围宽，药品廉价易得，简便、快速，有一定实用性。

3.8　样品分析

采用本方法对含有20～30倍Fe3＋，Cu2＋、Ca2＋和Zn2＋的合成样品中DNA，RNA进行了分析。对标准含量为1.50和2.00 mg/L的DNA，6次测定结果分别为1.52和2.08 mg/L，相对标准偏差分别为3.1%和2.5%；对标准含量为4.00和5.00 mg/L的RNA，6次测定结果分别为3.92和4.91 mg/L，相对标准偏差为1.7%和2.8%。　　

分析化学减色效应

在分析化学中，是指：化合物结构改变或其他原因，使吸收强度减弱的效应，也称为淡色效应。

在分子光谱中有机化合物的特定发色团吸收峰摩尔吸光系数降低；而且其吸收峰位置产生向蓝位移现象，称为减色效应。它是由于化合物分子结构发生变化产生向蓝基团所引起的这种现象。如在相等物质的量的核苷酸溶液中，游离核苷酸在260nm处的吸光率较单链DNA高，而单链DNA的吸光率又比双链DNA高的现象。这是由于多核苷酸链结构中碱基自由旋转受阻所致。通过在波长260nm处记录溶液的光密度，能够追踪DNA的变性作用。　　

光学减色效应

光的减色效应是指从白光或复合光中减去某种色光，而得到另一种色光的效应。

光的减色效应概括起来有以下规律：

1、原色（红、绿、蓝）滤光器，只允许和本滤色镜颜色相同的色光透过，吸收其它色光。

白光是由等量的红光、绿光、蓝光混合而成的。当白光通过红滤镜时，它只允许本色光透过，吸收绿光和蓝光。绿滤镜允许透过绿光，吸收红光和蓝光；蓝滤镜允许透过蓝光，吸收红光和绿光。

2、补色（黄、品红、青）滤光器，也称中间色滤光器，它允许与本滤色镜颜色相同的色光透过，同时还允许形成这一补色的其它两种原色光透过，吸收其它色光。

补色滤镜中的黄滤镜，允许黄光和红光、绿光透过，吸收与黄光互为补色的蓝光；品红滤镜可以透过品红光和红光、蓝光，吸收绿光；青滤镜可能透过青光和绿光、蓝光，吸收红光。

3、两种补色滤镜叠加使用，只允许形成这两补色所共有的一种原色光透过，吸收其它色光。

4、两种原色滤镜叠加，各种色光均被吸收，或根据某一种滤色镜的浓淡程度，透过部分色光。

5、三补色滤镜叠加，各种色光相继被吸收，最终都不能透过，而呈现出黑色效果。如果三补色颜色均较淡，叠加后三滤镜本身呈现中性灰色，这时白光还能透过一部分，但强度明显较弱。

从上述滤光器的透光规律可以看出，滤光器不论是装在照相机、摄影机、摄像机的镜头前端或后端，它都会根据滤光器的颜色、深浅程度，对不同波长的光波进行吸收与透过。当滤色镜运用于黑白摄影中，由于滤光器的颜色不同，则会改变景物在画面中的影调、反差。如果加用的滤色镜与景物颜色相一致，那么，拍摄后画面中该景物的颜色就会形成较浅或明亮的影调；如果景物中的颜色与滤色镜不一致，则该景物的颜色在拍摄后的画面中影调变暗。当有色滤光器运用于彩色摄影摄像中，画面效果会根据所加滤色镜的颜色而形成与滤镜颜色相一致的色调。