https://www.fzdh.com/index.php?action=history&feed=atom&title=%E6%96%91%E7%82%B9%E6%9D%82%E4%BA%A4 2024-11-01T16:34:18Z 本wiki的该页面的版本历史 MediaWiki 1.35.1 https://www.fzdh.com/index.php?title=%E6%96%91%E7%82%B9%E6%9D%82%E4%BA%A4&diff=74394&oldid=prev 2014-01-26T08:27:14Z

<p>以“是指将待测的DNA变性后点加在<a href="/%E7%A1%9D%E9%85%B8" title="硝酸">硝酸</a>纤维素膜（或<a href="/%E5%B0%BC%E9%BE%99" title="尼龙">尼龙</a>膜,NC膜）上，用已标记的<a href="/%E6%8E%A2%E9%92%88" title="探针">探针</a>进行杂交，洗膜(除去未接合的探...”为内容创建页面</p> <p><b>新页面</b></p><div>是指将待测的DNA变性后点加在[[硝酸]]纤维素膜（或[[尼龙]]膜,NC膜）上，用已标记的[[探针]]进行杂交，洗膜(除去未接合的探针)，[[放射自显影]]，判断是否有杂交及其杂交强度，主要用于[[基因]]缺失或拷贝数改变的检测。<br /> <br /> [[斑点杂交]]（Dot blot）是将被检[[标本]]点到膜上，烘烤固定。这种方法耗时短，可做半定量分析。一张膜上可同时检测多个样品，为使点样准确方便，市售有多种多管吸印仪（Manifold），如MinifoldⅠ和Ⅱ、Bio-Dot(Bio-Rad)和Hybri-Dot，它们有许多孔，样品加到孔中，在负压下就会流到膜上呈斑点状或狭缝状。反复冲洗进样孔，取出膜烤干或[[紫外线]]照射以固定标本，这时的膜就可以进行杂交。 <br /> <br /> （1）DNA斑点杂交： <br /> <br /> ①先将膜在水中浸湿，再放到15×SSC中。 <br /> <br /> ②将DNA样品溶于水或TE，煮沸5min，冰中速冷。 <br /> <br /> ③用铅笔在滤膜上标好位置,将DNA点样于膜上,每个样品一般点μl(2~10μg DNA)。 <br /> <br /> ④将膜烘干，密封保存备用。 <br /> <br /> （2）RNA斑点杂交：与上法类似，每个样品至多加10μg总RNA（经酚/[[氯仿]]或异硫氰酸胍提取[[纯化]]），方法是将RNA溶于5μl <br /> <br /> DEPC水，加5μl[[甲醛]]/SSC[[缓冲液]]（10×SSC中含6.15mol/L甲醛），使RNA变性，然后取5-8μl点样于处理好的滤膜上，烘干。 <br /> <br /> （3）完整[[细胞]]斑点杂交：应用类似检测[[细菌]][[菌落]]的方法，可以对[[细胞培养]]物的特异序列进行快速检测，将整个细胞点到膜上，经NaOH处理，使DNA暴露、变性和固定，再按常规方法进行杂交与检测。有人曾用此法从105个培养细胞中检测到至少5pg的Epstein-Barr[[病毒]]DNA。完整细胞斑点[[印迹法]]可以用于筛选大量标本，因为它使细胞直接在膜上溶解，所以DNA含量甚至比常用的提取法还高，又不影响与32P标记的探针杂交，但它不适用于非放射性标记探针，因为DNA纯度不够，会产生高[[本底]]。</div>

112.247.109.102