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{{百科小图片|bk7ye.jpg|}} [[酪氨酸酶]]是黑素合成的关键酶,可能是[[白癜风]][[自身免疫]]的重要[[抗原]]。最近发现部分白癜风患者[[血清]]中有酪氨酸酶[[抗体]],且与白癜风[[临床类型]]和分期密切相关。提示自身免疫性白癜风发病机制与酪氨酸酶抗体水平有关,为其[[免疫治疗]]提供依据。酪氨酸酶抗体可以作为白癜风活动性的一个指标。 酪氨酸酶(TYR)是一种75kD含铜酶,来源于[[胚胎]][[神经]]峭[[细胞]],是黑素[[代谢]]和[[儿茶酚胺]]的关键酶。Spritz等[1]证实人TYR是一种铜[[结合蛋白]],有铜A和铜B[[位点]]。离子铜特异性能与人TYR结合,一个位点的铜结合可以促进另一个位点的铜结合。[[组氨酸]]在铜B位点协调其结合。TYR的[[多肽]]链的适当折叠对铜结合及其[[催化]]活性是关键性的,TYR[[突变]]可中断铜结合使其催化活性丧失。眼、[[皮肤]][[白化病]]是由于TYR[[基因突变]]所致,该病TYR阳性患者色素性皮肤损害发生率高[2]。[[超氧化物]]负离子(O2-)能穿透[[黑素细胞]](MC)[[入胞]]内,TYR通过利用O2-保护MC,免受O2-[[细胞毒]]作用[3,4]。在[[黑素瘤]]患者黑素瘤细胞(MMC)和MC中抗氧化系统失衡,内源性反应性氧生成,细胞内不能抵御内源性超氧化物的攻击[5]。白癜风患者血清中TYR抗体的生成,提示白癜风的发病与自身免疫有关。 ==酪氨酸酶的[[抗原性]]== 酶是多种自身免疫紊乱性[[疾病]]的[[自身抗原]][6],TYR作为抗原必需具备下列条件:①酶活跃性;②[[免疫原性]];③能诱导识别自身的抗体。 TYR能暴露于[[免疫系统]]中,从恶性或正常[[色素细胞]]来源的TYR,可以作为[[自身抗体]]产物的靶抗原;TYR与[[蛋白酶]]等无[[交叉反应]],提示抗TYR抗体对TYR是特异性的,MC能表达MHCⅡ[[类分子]],可作为抗原递呈细胞。人MMC能分泌TYR,TYR抗体在黑素瘤患者血清中发现,其它[[恶性肿瘤]]患者血清中则没有,提示[[恶性黑素瘤]]可产生抗TYR的抗体[7,8],TYR[[基因]]编码抗原能被黑素瘤[[细胞毒性]]T细胞(CTL)识别[9],显示系统免疫系统能对TYR发挥作用[10]。 哺乳动物[[黑素生成]]由多个[[基因位点]]共同参与调控。不同位点基因及相关[[蛋白]]具有多种特征性结构位点(B位点,C位点,S位点和P位点)。哺乳动物色素细胞[[调节基因]]有多种,这些基因的最大特点是定位于C位点(C-allbino locus),编码TYR。鼠C位点基因长70kb,定位第7号[[染色体]],人C位点基因长50kb,定位11号染色体。鼠及人C位点基因均含有5个[[外显子]]和4个[[内含子]]。TYR是一种膜[[糖蛋白]],可在MC中特异性表达。B位点(brown locus)基因编码TRP-1(gp75)。鼠B位点基因长18kb,有8个外显子和7个内含子,定位14号染色体。人B位点[[基因定位]]第9号染色体。TRP-1能在MC中表达且定位[[黑素体]]膜,具[[酪氨酸羟化酶]]和[[多巴]][[氧化酶]]活性。S位点(slaty locus)基因编码TRP-2,小鼠S位点基因位于第14号染色体,为多巴色素[[异构酶]]。鼠及人P位点(Pmel-17 locus)基因编码stablin蛋白,人及鼠P位点基因定位第10、12号染色体,参与黑素合成终末途径的调节。 TYR、gp75、TRP-2结构相似,其[[基因产物]]有下列特点:①高[[同源性]]([[氨基酸]]序列相同40%,相似45%)。②分子量几乎相同。③[[三级结构]]有高度[[保守序列]][[半胱氨酸]][[残基]]。④具有[[酶活性]]铜结合位点。⑤含有跨膜区。 TYR是黑素合成的关键酶,其已知的氨基酸序列含有一段前导[[信号肽]]和一个跨膜结构基元(motif),与黑素体膜上的锚定蛋白(anchorin)相一致。HLA-A2递呈TYR抗原,不同的细胞毒性T[[淋巴细胞]]克隆识别具有活性基元的九[[肽]]LLAVLYCLL,说明TYR在不同个体的表达呈相当高的同源性。TYR的表达均一性优于TRP-2,表达频率亦较TRP-1高。除CD8+T细胞外,人CD4+T细胞也能特异性识别TYR基因编码的相关抗原。黑素瘤患者中检出TYR,TYR是MMC上的[[分化抗原]]。可作为主动[[免疫]]的良好抗原靶。TYR既受MHC-Ⅰ限制,又受MHC-Ⅱ限制的黑素瘤[[共同抗原]],诱生的CD8+T细胞和CD4+T细胞均能产生有效的抗肿瘤应答。TRP-1[[原位杂交]]证实编码基因位于人第9号染色体q23区,为IgG抗体识别抗原,具有DHI-2[[羧酸]]氧化酶活性,非突变型TRP-1抗原可被HLA-A31特异性CTL识别。外源性TRP-1cDNA在MMC等中表达。gp100即MC/MMC特异性蛋白Pmel-17,免疫电镜证实gp100主要位于Ⅰ、Ⅱ期黑素体膜,广泛表达于人MMC(50%)。HLA-A2 mMC的gp100可被自体[[肿瘤浸润性淋巴细胞]](TIL)识别。识别部位是十肽LLDGTATLRL(aa457-486),从gp100提取的十肽能体外诱导TIL,将TIL细胞与IL-2[[配伍]]应用于HLA-A2+黑素瘤患者,可消除自发性黑素瘤的转移灶。 ==酪氨酸酶抗体== ===(一)检测方法:=== TYR抗体在白癜风患者血清中检出。Song等[11]1994年用[[细菌]]合成人TYR,[[免疫印迹法]]检测TYR抗体。这种方法相对不敏感且不能定量检测。Baharav等[12]1996年使用[[蘑菇]]TYR,ELISA法检测TYR抗体,此法敏感,但所用蘑菇TYR与人TYR同源性低。而Xie等[13]1996年则用人MC提取物作为TYR的来源,[[免疫沉淀法]]等检测TYR抗体。Kemp等[14]1997年采用放免法(RIA)检测TYR抗体。近来此法已被用来检测[[自身免疫性疾病]]患者血清中的[[特异性抗体]][15-17]。这种方法能敏感定量检测抗体。 ===(二)产生、特点、特性:=== 1.抗TYR抗体的产生:用人TYR cDNA[[转染]]L细胞,获得L-TY细胞,免疫同源性C3H鼠,即用5×106L-TY细胞与等量Frend[[佐剂]]混合,[[腹膜]]内注入有6周鼠龄的雌性C3H鼠体内,每次间隔2周,第3,4次用5×106细胞裂解物与等量Frend佐剂混合免疫动物。第4次注射后3天,抽血,分离血清,同时用未转染L细胞去除非特异反应性成分,结果用人TYR cDNA转染L[[细胞免疫]]的8只C3H鼠中,4次免疫后,有4只对TYR cDNA转染L细胞的鼠[[血清抗体]][[滴度]]>10-4,C3H鼠免疫前及正常鼠对L-TY细胞无反应性。用L-TY细胞免疫动物获得的血清能沉淀L-TY和有色素MMC细胞裂解物。免疫沉淀法可见分子量为70kD~80kD的宽幅条带,可能为TYR[[生物合成]][[中间代谢]]产物,未转染L细胞,TYR阴性无色素MMC中未见特异性条带。 2.免疫印迹法检测TYR抗体:用抗TYR血清10-3稀释度,在TYR转染L细胞和有色素MMC可见细胞内颗粒[[染色]],[[亲代]]L细胞内无胞内染色,在L-TY细胞,细胞内染色颗粒位于核周和[[胞质]]内。无色素MMC,不表达TYR mRNA,无TYR活性,与TYR抗体无相互作用。有色素MMC和培养MC,高度表达TYR活性,黑素形成多,[[细胞质]]颗粒深度染色。 [[单克隆抗体]]TA99能识别TRP-1糖蛋白,TA99能与人有色素MMC表达的TRP-1和转染L-GP细(用编码TRP-1全长cDNA转染鼠L细胞获得)表达的全长人TRP-1cDNA相互作用,且免疫耗竭实验证实TA99不耗竭能产生分子量为70kD~80kD条带的抗TYR血清,[[免疫荧光]]分析抗TYR抗体与TRP-1,TYR l-GP细胞无相互作用,抗TYR抗体不沉淀来自L-GP细胞的TRP-1。 3.TYR抗体使TYR活性丧失:免疫鼠血清能沉淀鼠MMC,L-TY细胞裂解物,提示免疫鼠血清能灭活有色素MMC及L-TY细胞TYR的活性,加入L-多巴[[底物]]后,见黑素形成,提示TYR活性恢复,免疫沉淀时如用免疫前血清则无黑素形成[7]。 ==白癜风== ===简介=== 白癜风与TYR抗体:TYR抗体在白癜风中常常发生。Song等[11]应用免疫[[印迹法]]检测了26例白癜风患者血清,其中有16例(61%)可与[[重组]]TYR特异性结合。26例白癜风患者,有16例(61%)血清TYR抗体阳性,其中7例伴发非胰岛素性[[糖尿病]](IDDM)有4例(57%)、8例伴发[[桥本甲状腺炎]]有4例(50%)、3例伴发Grave病有3例(100%)、7例伴发Addison病有4例(57%)阳性。Kemp等[14]应用35S标记人TYR,放免法(RIA)检测白癜风患者血清TYR抗体。在被检测的46例白癜风患者的血清中,5例(10.9%)TYR抗体阳性,20例对照血清及10例桥本甲状腺炎患者血清阴性。Baharav等应用固相ELISA法检测18例白癜风患者(弥漫性7例,局限性1例)血清中的TYR igG[[抗体滴度]],结果(OD均值)弥漫性白癜风为0.658±0.251,局限性白癜风0.188±0.05,健康对照组0.093±0.049,显示弥漫性白癜风TYR igG抗体滴度较局限性白癜风及健康对照组显著增高。这些TYR抗体与TYR的亲和力高,与b位点基因产物TRP-1没有交叉反应[12]。 大多数急性白癜风及黑素瘤患者有对MC、MMC的抗体,这些抗体在体外通过[[补体]]介导细胞毒作用和抗体依赖细胞毒作用杀伤MC。Cui等检测发现30例黑素瘤患者血清有24例(80%)、29例白癜风患者血清有24例(83%)抗体阳性,而28例对照组只有2例(7%)阳性。人及动物黑素瘤中,白癜风的出现能改变其进程。用MMC免疫动物可诱发白癜风。重组抗MMC抗体对黑素瘤有效[18]。黑素瘤伴发白癜风时预后较好,白癜风患者抗体出现的频率和水平与黑素瘤退变(regression)一致。提示抗白癜风和黑素瘤抗体作用于色素细胞(MC,MMC)上有相同的抗原,并且这些抗原能在MC和MMC上表达[19]。白癜风MC抗体既能溶解MC,致皮肤[[白斑]]形成,又能有效破坏MMC;MMC抗体也能与正常MC结合,诱导黑素瘤产生白癜风样白斑,TYR抗体则是二者之间的桥梁。 白癜风患者血清MC抗体滴度与该病活动性和严重程度密切相关,50%局限性白癜风患者血清中有对MC的抗体,而弥漫性白癜风则高达93%,且弥漫性白癜风MC抗体能与MMC结合,抑制其[[增殖]]。在补体存在的情况下溶解细胞,减少体内鼠黑素瘤转移,MMC上抗体[[表位]]滴度在白癜风较健康者及黑素瘤高。黑素体是黑素合成和贮存的亚细胞器,Ando等[20]认为黑素体数量变化与TYR mRNA水平有关。UVB上调TYR mRNA水平致[[皮肤色素沉着]][21]。TYR和gp75都是黑素体转膜糖蛋白,TYR抗体与gp75没有交叉反应[22]。 白癜风患者血清含有抗MC抗体,MC抗体在Smyth鸡模型中于脱色前数周被检测到。近来黑素瘤患者血清中亦分离到TRP-1自身抗体,循环中的这些抗体被认为是导致Smyth鸡[[色素脱失]]斑的主要原因[23,24]。白癜风患者血清中TYR抗体的检出,进一步提示白癜风的[[分子]]发病机制,为[[临床分型]]、分期、治疗及预后提供依据。 ===其他=== 一种皮肤及其附属物色素缺乏的[[遗传病]]。可分全身性白化病和局部性白化病两种,以前者最为常见。患者皮肤呈白色,[[毛发]]银白或淡黄色;[[虹膜]]呈淡红色或淡灰色,半透明,[[瞳孔]]淡红,[[视网膜]]无色素、羞光,[[眼球震颤]],[[视力]]下降;病人对阳光很敏感,日晒后,皮肤可增厚并发生[[鳞状上皮]][[癌]]。白化病的发病是由于[[黑色素]][[代谢障碍]]所致。正常人体内的黑色素由[[黑色素细胞]]合成,黑色素细胞内有黑[[素小体]],它含有酪氨酸酶,这种酶能将[[酪氨酸]]转变成黑色素。白化病患者体内黑色素细胞数目正常,细胞内也有黑素小体,但由于控制酪氨酸酶的基因发生突变,不能合成酪氨酸酶,于是黑素小体中酪氨酸酶缺乏,不能使酪氨酸转变成黑色素,从而导致皮肤、粘膜、毛发、眼等白化。白化病有多种遗传方式。全身性白化病属[[常染色体隐性]]遗传方式。局部白化病为[[常染色体]][[显性]]遗传,[[眼白化病]](皮肤、毛发均正常)可为X伴性隐性或常染色体隐性遗传。白化病遍及全世界,总[[发病率]]为1/10000~1/20000。对白化病目前尚无有效的治疗方法,因此应以预防为主。禁止[[近亲结婚]]是重要的预防措施之一。对此病也可作[[产前诊断]]。在[[妊娠]]4~5个月时,通过[[胎儿]]镜取胎儿一小块皮肤,在电子显微境下检查胎儿是否为白化病,以避免患儿的出生,达到优生的目的。在遗传的方式上白化病是属于常染色体上的隐性遗传。只有当个体为隐性[[纯合子]](aa)时,才表现为白化病,通常白化病患者的父母为[[表型]]正常的[[杂合子]],其因型为(Aa)是致病基因的[[携带者]],患者同胞中也有1/4的发病风险。 ==五如何区分白化病与白癜风?== 白化病与白癜风均属于色素障碍性[[皮肤病]]。二者都是以皮肤出现白斑为主要[[临床表现]],无明显痒痛感觉。但白化病与白癜风是截然不同的两种疾病。临床多从如下几方面来区分: ===(1)发病年龄=== 白化病自出生时就有明显的“变白”表现;而白癜风为后天发生,可开始于任何年龄,但以20岁以前发病人数最多。 ===(2)家族史=== 白化病有典型的家族遗传史;白癜风的发病与遗传有一定关系,但无大量的统计资料来证实,我国学者报告白癜风与遗传有关联者仅占3.9%~10.7%。 ===(3)好发部位=== 泛发性白化病是全身的皮肤、毛发及眼睛均变白;白癜风可发生在任何部位,但好发于暴露及皱褶部位。 ===(4)白斑特点=== 白化病的皮肤全部变白,毛发呈白色或淡黄色,眼睛缺乏色素,[[畏光]],白天视物不清;白癜风的白斑仅限于局部,边缘清楚,周边色素稍深,白斑中有的散在岛屿状色素区,白斑大小、形态不一,[[物理]]刺激可诱发新的白斑或使原有白斑扩大。白斑上的毛发可以变白或者不白。 ===(5)[[病理]]检查=== 取患者皮肤组织制成切片,在[[显微镜]]下观察:白化病患者表皮黑色素完全消失;而白癜风患者白斑区黑色素减少或完全消失,而边缘则黑色素相对增加。 ===(6)治疗=== 白化病药物治疗无效,仅能通过物理方法遮光以减轻患者不适[[症状]];白癜风通过使用光敏性药物、[[激素]]及[[中药]]等治疗后白斑会减弱甚至消失。 白化病人应该注意些什么? 白化病是一种遗传性皮肤病,治疗上没有确切有效的方法。白化病人应注意以下几方面:①避免强烈的日光照射;②注意保护眼睛;③避免近亲结婚。 [[分类:生物化学]][[分类:生物]][[分类:化学]][[分类:蛋白质]]
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